- 贺鸿世;姚一龙;索朗斯珠;孟朝轶;孔庆辉;席广银;郭敏;徐业芬;
旨在筛选在牦牛卵泡发育过程中可能吸附bta-miR-125b的长链非编码RNA(lncRNA),并构建双荧光素酶载体与慢病毒过表达载体,为研究调控牦牛生殖相关lncRNA的功能及机制提供基础。利用miRanda与RNAhybrid数据库预测可能靶向牦牛bta-miR-125b的lncRNAs,筛选出bta-miR-125b具有“海绵吸附”作用的lncRNAs,由RNAhybrid进行结合位点预测,筛选出最优的lncRNA;采集牦牛卵巢分离卵泡并提取总RNA构建cDNA池,以RT-PCR技术扩增筛选所得lncRNA;在此基础上利用pmir-GLO载体构建技术构建该lncRNA野生型及突变型双荧光素酶报告载体,并将其与bta-miR-125b mimics共转染至293T细胞,检测双荧光素酶活性;最后利用慢病毒载体构建技术将测序正确的lncRNA与pHBLV-CMV-MCS-EF1-ZsGreen-T2A-puro载体同源区的片段同源重组,通过慢病毒包装系统(psPAX2:pMD2G)包装后感染293T细胞,计算感染效率及滴度。结果:两个数据库中的lncRNA-ARS-UCD1.2与bta-miR-125b存在紧密结合位点,扩增出lncRNA-ARS-UCD1.2的序列全长为1 552 bp;双荧光素酶活性检测表明牦牛lncRNA-ARS-UCD1.2与bta-miR-125b mimic具有靶向关系(P<0.01);同源重组后经酶切鉴定及测序验证表明成功构建了重组质粒,感染效率达(61.520±0.875)%,感染滴度为4×10~8 TU/mL,表明lncRNA-ARS-UCD1.2过表达慢病毒载体成功构建。综上,本试验筛选出牦牛“海绵吸附”bta-miR-125b的lncRNA,并验证了两者的靶向结合关系,同时成功构建了该lncRNA的过表达慢病毒载体,为下一步深入研究lncRNA在细胞中的功能机制奠定了基础。
2024年09期 v.56;No.470 1-8页 [查看摘要][在线阅读][下载 1264K] [下载次数:198 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:2 ] - 龙霞;李辉;王文亮;谭启松;赵德鹏;石钰仕;余欢;陈友波;
旨在探讨贵州省4个地方乌骨鸡品种的肤色差异及其原因。选择普安乌金鸡、乌蒙乌骨鸡、赤水乌骨鸡和黔画乌鸡各60只(公母各半),使用3nh色差仪测量背部肤色、翅下肤色、胫色和鸡冠色,记录色差仪中亮度(L~*)值、红度(a~*)值、黄度(b~*)值并进行统计分析。结果:各部位的L~*值显著相关(P<0.05),鸡冠的L~*、a~*、b~*值与几个部位的肤色具有显著差异(P<0.05),普安乌金鸡背部和翅下的L~*值显著低于其他3个品种(P<0.05),乌蒙乌骨鸡鸡冠的a~*值最高(P<0.05),黔画乌鸡4个部位的b~*值均较大。综上,鸡冠色与其他3个部位肤色差异较大,在贵州地方乌骨鸡品种中普安乌鸡肤色背部和翅下肤色最乌,乌蒙乌骨鸡鸡冠色偏红,黔画乌鸡肤色偏黄。
2024年09期 v.56;No.470 9-14页 [查看摘要][在线阅读][下载 1478K] [下载次数:222 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:1 ] |[阅读次数:1 ] - 李鑫;陈小辛;张俪萍;柳俭强;安鼎杰;李旭;张宇霄;张立春;
为探讨地方鸡瘦素受体(LEPR)基因遗传多样性及其与生产性状的相关性,以吉林黄鸡、北京油鸡及其正反交杂群体为研究对象,通过基因组PCR直接测序挖掘LEPR基因多态位点,再采用竞争性等位基因特异性PCR(KASP)进行基因分型检测,最后采用单因素方差分析对各群体内不同基因型个体屠宰与肉质性状进行相关性分析。结果:LEPR基因内含子2存在3个SNP位点,其中g.735 G>A与报道一致;KASP法对g.427 C>T和g.735 G>A位点遗传多样性分析发现g.427 C>T位点在吉林黄鸡(HH)群体中T∶T为主要基因型,北京油鸡(YY)为C∶C型,g.735 G>A位点在4个群体中A∶G均为主要基因型,g.427 C>T位点除了HH群体外,其他群体均处于哈迪-温伯格不平衡状态,而g.735 G>A位点全都处于平衡状态;相关分析发现两位点均与腹脂率相关,但各群体间不同基因型并未表现明显的一致性,大部分群体中g.735 G>A位点不同基因型还与脚重,胸肌和腿肌滴水损失密切相关。综上,地方鸡LEPR基因多态位点及与屠宰和肉质性状相关分析为利用该基因进行优质鸡选育提供理论依据。
2024年09期 v.56;No.470 15-22页 [查看摘要][在线阅读][下载 2094K] [下载次数:294 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:2 ] - 杨雪梅;陶璇;顾以韧;梁艳;雷云峰;杨跃奎;曾凯;王言;陈晓晖;龚建军;吕学斌;
旨在研究内江猪群体的亲缘关系和遗传结构。采用“中芯一号”芯片检测30头内江猪的单核苷酸多态性(SNP);采用GCTA软件构建G矩阵,PLINK软件构建状态同源(IBS)距离矩阵,分析内江猪群体的亲缘关系;采用Mega X软件构建群体进化树,分析内江猪群体的遗传结构。结果:共检测到57 466个SNP位点,29 468个SNP位点通过质量控制;内江猪试验群体具有中等程度的亲缘关系;群体进化树将内江猪公猪被分为6个血缘,血缘数量与传统系谱记录的基本相同;基于连续性纯合片段(ROH)的平均近交系数为0.243。综上,内江猪血缘较少,有一定程度的近交,可引入新血缘,提高群体遗传多样性和种群质量。
2024年09期 v.56;No.470 23-27页 [查看摘要][在线阅读][下载 1308K] [下载次数:225 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:1 ]
- 陈作鑫;姜雪芹;刘梦凡;赵梓桥;魏无缺;李树稳;张雪莲;刘兆洁;黄淑坚;梅堃;
旨在对鸭腺病毒3型(duck adenovirus 3, DAdV-3)广东流行株进行分离,并预测分析六邻体(Hexon),五邻体(Penton),纤维蛋白(Fiber1、Fiber2)4个主要结构蛋白的理化性质、结构及功能。本研究用鸡肝癌细胞(LMH)对疑似DAdV-3感染的鸭、鹅肝脏组织进行病毒分离,对3株病毒分离株主要结构蛋白进行基因克隆、测序、拼接,获得4个蛋白的核苷酸序列后,使用MEGA 11软件进行氨基酸序列分析并构建遗传进化树,利用Expasy-ProtParam与SOPMA软件分析4个蛋白的理化性质与二级结构,应用AlphaFold2软件预测4个蛋白的三级结构,并对4个蛋白的线性B细胞抗原表位进行预测。结果:成功分离得到3株DAdV-3,命名为XZD-2021株、FRK-2021株、825-1-2021株;3株DAdV-3的4个蛋白均与GenBank中其他DAdV-3分离株处于同一分支中;Hexon蛋白更接近鹅腺病毒4型,Penton蛋白更接近D种禽腺病毒,Fiber1、Fiber2蛋白则更接近鸽腺病毒1型;4个蛋白均为酸性亲水蛋白,无信号肽,Hexon、Fiber1、Fiber2蛋白以自由卷曲为主,Penton蛋白则以α螺旋为主;三级结构预测结果与二级结构结果相符,线性B细胞抗原表位预测发现,Hexon蛋白的线性B细胞抗原表位最多,为11个,Penton蛋白与Fiber2蛋白为6个,Fiber1蛋白为5个,但Fiber1蛋白位于病毒表面的抗原表位最多,表位长度较Fiber2更长,且多位于负责与宿主细胞受体结合的头节区。综上,本研究成功分离得到3株DAdV-3,并对其4个主要结构蛋白进行了遗传演化、二级结构、三级结构等生物学特性进行分析,研究结果为后续DAdV-3致病特性和免疫特性研究奠定基础。
2024年09期 v.56;No.470 61-69页 [查看摘要][在线阅读][下载 2346K] [下载次数:480 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:1 ] |[阅读次数:1 ] - 班万里;徐晶;刘帅;卡马力·吾力江;潘星羽;王冰洁;王延;塔力甫汗·古丽扎提;特列吾汗·穆尼拉;赵莉;张壮志;
旨在建立敏感特异的犬细粒棘球绦虫(Eg)抗原ELISA检测方法。用细粒棘球绦虫表膜抗原(EgSfAg)免疫兔获得抗血清,同时利用抗EgSfAg杂交瘤细胞株4E8制备单抗,通过亲和层析获得纯化的多抗和单抗4E8,制备Eg、多房棘球绦虫、泡状带绦虫、多头绦虫和犬弓首蛔虫等5种蠕虫抗原作为特异性质控样品,利用单抗4E8进行Western blot检测,通过人工感染犬结合氢溴酸槟榔碱下泄法制备阳性对照样品,同时设置敏感性质控样品和阴性对照样品,构建样品盘,以多抗为捕捉抗体,HRP标记的单抗4E8为检测抗体,建立犬Eg抗原ELISA检测方法,并验证该方法的敏感性和特异性。结果:Western blot检测证明单抗4E8仅与EgSfAg有特异性反应;建立的ELISA检测方法最低检出量为1∶512;对130份阳性样品的平均检出率为95.38%;交叉试验结果显示仅EgSfAg结果为阳性;检测150份阴性样品的平均符合率为95.56%。综上,建立的ELISA方法具有较好敏感性和特异性,为终末宿主棘球蚴病的诊断和流行病学调查提供了一种安全、简便、高效的免疫学检测方法。
2024年09期 v.56;No.470 70-74页 [查看摘要][在线阅读][下载 940K] [下载次数:236 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:1 ] |[阅读次数:1 ] - 田光明;张高峰;杨俊杰;杨宏春;蒋立人;王鑫;陈俊池;商雨;温国元;罗青平;
旨在从送检的病鸡中分离鉴定出禽腺病毒(fowl adenovirus, FAdV),为临床诊断和疫病防控提供参考依据。本研究将阳性样品接种SPF鸡胚并传代,利用PCR检测、基因序列分析、动物回归试验等方法鉴定病毒。结果:经过鸡胚传代及病毒特异性检测获得了纯净的FAdV,命名为HB2306;分析Hexon基因序列可知,HB2306株属于血清4型分支,与国内外分离的FAdV-4毒株核苷酸序列同源性为98.2%~99.9%,HB2306株与国内外的4型高致病性毒株氨基酸序列相似性在97.9%~99.8%;受试动物临床病理变化显示,HB2306株以10~(4.5) EID_(50)/只的剂量经胸部肌肉注射后,引起宿主心包积液,肝脏变黄肿胀、淤血出血,肾出血、肿胀等典型的病理变化,与流行的高致病性毒株所致临床症状相似,且死亡率为100%。综上,本研究成功分离并鉴定出一株FAdV-4高致病力毒株,丰富了毒种库,为该病毒感染的流行情况调查和综合防控奠定了基础。
2024年09期 v.56;No.470 75-83页 [查看摘要][在线阅读][下载 2050K] [下载次数:593 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:3 ] |[阅读次数:1 ] - 黄雅琴;蔡金双;缪芬芳;李玉峰;
旨在制备猪丹毒杆菌单克隆抗体,并确定其识别的抗原表位。采用原核表达、细胞融合试验、间接ELISA、亚克隆技术、Western blot、抗原表位以及抗体分型鉴定来研究猪丹毒杆菌表面保护性抗原A(SpaA)的单克隆抗体。结果:制备了SpaA重组蛋白,得到4株稳定分泌的单抗,且这4株单抗均能与SpaA蛋白发生特异性反应,其中1E8、5B3杂交瘤细胞培养上清液抗体效价为1∶1 600,5B5、9B5杂交瘤细胞培养上清液抗体效价为1∶3 200;1E8重链为IgG 2b, 5B3、9B5重链为IgG 1,5B5重链为IgG 2a,轻链均为Kappa; 1E8、5B5识别的抗原表位因SpaA蛋白C端的重复序列无法确认,5B3识别的抗原表位为258~267 aa, 9B5识别的抗原表位为462~472 aa。综上,本研究制备的单克隆抗体将为猪丹毒杆菌ELISA检测方法的建立奠定基础。
2024年09期 v.56;No.470 84-90页 [查看摘要][在线阅读][下载 1252K] [下载次数:351 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:1 ] - 扈富哥;宫英杰;王蕾;莫菲;毕振威;钱晶;孙斌;谭业平;
旨在建立犬瘟热病毒(CDV)和犬腺病毒2型(CAdV-2)双重TaqMan荧光定量PCR(RT-qPCR)检测方法。本试验针对CDV的N基因和CAdV-2的E3基因设计两对特异性引物与两条标记不同荧光基团的TaqMan-MGB探针,对引物、探针的浓度、反应体系和反应条件进行优化后检测该方法的灵敏度,特异性及重复性。结果:该方法在CDV和CAdV-2阳性参考质粒浓度1×10~1~1×10~7 copies/μL的范围中,R~2值为0.997和0.993,表明所建的标准曲线具有良好线性关系,能检测到最低浓度为5 copies/μL,并对其他病原无扩增现象,特异性良好;重复性试验中组内和组间变异系数小于1.54%。综上,建立的双重TaqMan RT-qPCR检测方法具有灵敏度高且特异性好等优点,可用于CDV和CAdV-2临床快速检测和鉴别诊断及流行病学调查等领域。
2024年09期 v.56;No.470 91-95页 [查看摘要][在线阅读][下载 1085K] [下载次数:746 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:2 ] |[阅读次数:1 ]